Metilación del área promotora de CDKN2A en los cánceres de la vesícula biliar detectados por metilación específica mediante PCR

Modificación del ADN con bisulfito y test de metilación específica mediante PCR (MSP). El principio de la modificación de ADN con la técnica de bisulfito de sodio se basa en su capacidad de convertir a todos los residuos de citosina (C) no metiladas en uracilos (U), mediante deaminación, pero cuando la citosina está metilada es resistente a la reacción y permanece como citosina. Los iniciadores de PCR descritos por Herman et  aprovechan estas diferencias para discriminar entre aquellas frecuencias metiladas y no metiladas (Figura 2). Uno de los iniciadores de cada par fue marcado con g-ATP con polinucleótido-kinasa (PNK). Las mezclas de PCR contenían 100 nm de cada primer, 200 mM de cada dinucleótido y una concentración de magnesio de 1,5 mM. Las temperaturas óptimas de hibridación fueron de 60°C y 63°C para los iniciadores que detectaban el ADN no metilado y metilado, respectivamente. Las amplificaciones se realizaron mediante 40 ciclos.

Inactivación del gen CDKN2A: La amplificación del ADN tumoral por los iniciadores específicos para las secuencias metiladas fue detectada en 24% de los 38 cánceres de vesícula biliar produciendo una banda de 150 pb (Figura 2). El desbalance alélico en uno o más marcadores microsatelitales fue detectado en 11% de los 38 tumores de vesícula biliar.

Nuestros resultados mostraron una tendencia no significativa de peor pronóstico en el grupo de pacientes con inactivación del gen CDKN2A (p=0,09) este hecho concuerda con estudios en tumores de vesícula biliar y de otros órganos.

 Referencia: 

Antigua: BMC [Internet] ARN largo no codificante. 2019 [citado el 23 de noviembre del 2019] Disponible en: https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-019-1237-5

Actual: 

Roa S Juan Carlos, Vo Quynh, Araya O Juan Carlos, Villaseca H Miguel, Guzmán G Pablo, Ibacache S Gilda et al . Inactivation of CDKN2A gene (p16) in gallbladder carcinoma. Rev. méd. Chile  [Internet]. 2004  Nov [citado  2019  Dic  10] ;  132( 11 ): 1369-1376. Disponible en:https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?pid=S0034-98872004001100005&script=sci_arttext&tlng=en