Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa en la Colelitiasis

PCR-MULTIPLEX

TEMA: Efecto protector de α- talasemia en la colecistitis y la colecistectomía en la enfermedad de células falciformes

OBJETIVO: Conocer el papel protector de las deleciones de genes individuales de α- talasemia en la aparición de colelitiasis y colecistitis en pacientes de SCD, para correcto diagnóstico y tratamiento.

MUESTRA: Muestras de sangre periférica de 102 pacientes ambulatorios SCD (47% hombres y 53% mujeres).

TIPOS DE ADN: ADN genómico de muestras de sangre periférica.

GENES A AMPLIFICAR CON EL TAMAÑO EN PARES DE BASES: Genes individuales α-thal comunes -α 3,7 (2022/2029 pb); -α 4,2 (1628 pb) y el gen α 2 (1800 pb).

EXTRACCIÓN DEL ADN: 
El ADN genómico se aisló de sangre periférica. Leucocitos con Biopur Kit Mini Spin Plus (Biometrix® Diagnostic, Curitiba, Brasil) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Además, la muestra de ADN se cuantificó en NanoDrop ® (Thermo Scientific, EE. UU.).

PCR MULTIPLEX: 
-Desnaturalización: 95 ° C durante 5 min.

-Hibridación: 30 ciclos de hibridación (98 ° C durante 45 s, 63 ° C durante 90 s y 72 ° C durante 135 s).

-Elongación: 72 ° C durante 5 min.

MÉTODOS: El genotipo de α-globina se determinó en 83 pacientes con SCD utilizando la reacción en cadena de la polimerasa múltiple y se comparó con los eventos clínicos.

VISUALIZACIÓN: Electroforesis 15 μl de producto a través de un gel de agarosa al 1% en 1X TBE durante 1 hora.

SENSIBILIDAD y ESPECIFICIDAD: 

La presencia de cálculos biliares pigmentadas con diagnóstico fue confirmado por ultrasonografía (USG) ( n = 77/83) y / o por la colecistectomía ( norte= 38/83). Además, la presencia de dolor abdominal aguda recurrente asociada con colelitiasis se registró como la colelitiasis sintomática (26/38). (2) colecistitis: Cualquier episodio de dolor abdominal en el  cuadrante superior derecho con fiebre o Murphy positivo cuadrante superior derecho con fiebre o Murphy positivo cuadrante superior derecho con fiebre o Murphy positivo cuadrante superior derecho con fiebre o Murphy positivo cuadrante superior derecho con fiebre Murphy positivo cuadrante superior derecho con fiebre o Murphy positivo =21/38) requirieron hospitalización. (3) secuestro esplénico agudo (CULO): Cualquier registro de CULO y / o esplenectomía. (4) La hidroxiurea (HU): el uso de la terapia con medicamentos es para un período mínimo de 12 meses ( n = 61/83 pacientes)

Referencias Bibliográficas:
1. Pontes RM, Costa ES, Siqueira PFR, Medeiros JFF, Soares A, de Mello F V., et al. Protector effect of α-thalassaemia on cholecystitis and cholecystectomy in sickle cell disease. Hematology. 2017;22(7):444–9. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28220719

2. Vídeo obtenido de: https://www.youtube.com/watch?v=DZ7yHQAJBnw&feature=emb_logo